吏科都给事中空缺，能够胜任此职的，首推周士朴，其次是阮大铖，再次为魏大中。阮大铖巴结宦官，勒令周士朴不得升任，将吏科都给事中据为己有。赵南星讨厌他，想按惯例将阮大铖迁职，阮大铖怀疑左光斗从中捣鬼，很怀恨他。熊明遇、徐良彦都想当佥都御史，赵南星却引荐了左光斗，这二人也怀恨左光斗。江西人又因为其他原因怀恨魏大中，于是一起唆使给事中傅魁弹劾左光斗、魏大中跟汪文言狼狈为奸。左光斗上疏辩解，还揭发傅魁跟东厂理刑傅继教结拜为兄弟。傅魁又恨又怒，再次上疏攻击左光斗。左光斗请求罢官，事情才算完。
杨涟弹劾魏忠贤，左光斗参与谋划，又跟高攀龙共同揭发崔呈秀私藏赃物，魏忠贤和他的党徒都发怒了。等到魏忠贤赶走赵南星、高攀龙、魏大中，接下来就该轮到杨涟、左光斗。左光斗很气愤，草拟奏疏弹劾魏忠贤和魏广微三十二条死罪，准备在十二月二日上交，先派妻子儿女回到南方。魏忠贤刺探知道了，抢先二天利用推事将左光斗一起削籍为平民。小人们还不解恨，又制造汪文言案，列入左光斗的名字，派使者前往逮捕他，父老乡亲都拥在马首痛哭，声音在原野上回荡，皇帝的使臣也被感动得流下了眼泪。到京后，下诏打入监牢严刑拷问，许显纯诬陷他们接受杨镐、熊廷弼的贿赂。杨涟等人开始不承认，后来担心不承认会被拷打致死，希望把他们交给法司，能够延缓一下然后再做打算，各人都违心服罪。左光斗被定罪贪赃二万两。魏忠贤于是假传圣旨，仍然命令许显纯五天追问拷打一次，不交给法司，各人开始后悔失策。容城人孙奇逢是一位奇侠之人，跟定兴人鹿正认为左光斗对京城一带有功，倡议凑钱营救，大家争着响应。收集了几千两，商量交给内府，暂缓对他的处罚，而左光斗和杨涟已于同一天被狱卒打死了，这时是天启五年(1625)七月二十六日，终年五十一岁。
左光斗已经死了，赃款还没有还尽。魏忠贤命令抚按官严加追讨，牵连下狱的有十四人。长兄左光霁受牵连判罪致死，母亲过份悲伤也死了。都御史周应秩还认为有关部门不努力承办追查，上疏催促，因此他的家族都破产了。等到魏忠贤编修《三朝要典》，把杨涟、左光斗定为“移宫案”的首犯，议论打开棺材侮辱他们的尸体，有人说情，才得以幸免。魏忠贤死后，追赠左光斗右都御史，录用他的一个儿子。不久，又追赠太子少保。南明福王时，追加谥号忠毅。
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