苏云金芽孢杆菌Cry1类毒素免疫广谱检测技术研究

　　焦凌霞，女，博士，副教授，河南农业大学硕士生导师，河南省教育厅学术技术带头人。主要从事食品生物技术的教学科研工作，主持和参加省部级以上项目10余项，发表SCI论文10余篇。

采用正负筛选方法，成功获得六株具有Cry1Ab毒素蛋白结合活性的阳性噬菌体单域抗体菌株，利用基因工程抗体易于定向修饰及Cry毒素具有相似结构的特点，以Cry1Ab毒素单域抗体基因为材料，通过同源建模及分子对接技术分析了Cry1Ab抗体与五种Cry1类毒素的关键氨基酸结合位点，以关键结合位点及其邻近位点为目标，利用SPDBV软件进行虚拟协同突变，预测亲和力及广谱性都有所提高的突变抗体并通过定点饱和突变技术定向改造母本抗体构建突变抗体库；克隆表达了Cry1类毒素共性结构域并利用共性结构域蛋白包被和多种Cry1类毒素交替包被筛选策略，获取了五个检测对象可覆盖多种Cry1类毒素的广谱抗体，比较分析突变抗体和母本抗体的亲和力及广谱性，探索广谱抗体识别区的分子结构特性，为建立高灵敏度多种Bt Cry毒素的免疫筛查方法和开发Cry毒素高效检测技术奠定基础。